Фотохимические повреждения ДНК

Фотохимические повреждения ДНК возникают под действием ультрафиолетового (УФ) излучения, преимущественно в диапазоне 200–320 нм, а также некоторых видимых длин волн при наличии фотосенсибилизаторов. Основными мишенями являются пуриновые и пиримидиновые основания, содержащие π-электронные системы, способные поглощать фотонную энергию. Поглощение фотона приводит к возбуждённым состояниям нуклеотидов, что способствует формированию реакционноспособных конфигураций, способных к ковалентному сшиванию соседних оснований.

Типы фотохимических повреждений

1. Димеризация тимина (циклопиримидиновые димеры) Наиболее распространённый тип фотоповреждения — образование тиминовых димеров, особенно циклобутановых тимин-тиминовых димеров (CPD). Процесс включает переход электронов в возбужденное состояние, последующее образование ковалентных связей между C5–C6 соседних тиминов, что вызывает локальный изгиб и деформацию спирали ДНК. CPD нарушает комплементарное спаривание и блокирует репликацию и транскрипцию.

2. 6-4 фотопроизводные пиримидинов (6-4 PPs) Возникают при фотохимическом соединении C6 пиримидина с C4 соседнего пиримидина. Эти аддукты менее распространены, чем CPD, но обладают более выраженной структурной дестабилизирующей активностью. Они также служат мощными сигналами для клеточных механизмов репарации.

3. Фотопродукты, индуцированные фотосенсибилизаторами Некоторые органические и неорганические молекулы способны абсорбировать свет и передавать энергию ДНК, вызывая образование синглетного кислорода или радикалов. Эти активные формы кислорода индуцируют окислительные модификации оснований, разрывы цепей и ковалентные сшивки между цепями.

Молекулярные последствия повреждений

Повреждения ДНК приводят к:

  • Нарушению комплементарного спаривания — димеры тимина препятствуют образованию нормальных водородных связей с аденином.
  • Инактивации ферментов репликации и транскрипции — ДНК-полимеразы блокируются на участке повреждения.
  • Индукции мутаций — неправильное спаривание или репарация может приводить к замене оснований, делециям или инсерциям.
  • Дестабилизации хроматина — локальные деформации изменяют суперспирализацию ДНК и доступность генов.

Фотохимическая реакционная кинетика

Образование димеров происходит в фемтосекундной шкале, сразу после поглощения фотона. Вероятность образования зависит от длины волны, структуры ДНК, локальных последовательностей и наличия фотосенсибилизаторов. Показатели квантового выхода для CPD и 6-4 PPs различаются, что отражает разные механизмы перехода возбужденного состояния в химически активное состояние.

Биологические последствия

Фотохимические повреждения ДНК вызывают генетическую нестабильность, могут приводить к клеточной смерти (апоптозу) при накоплении повреждений или к канцерогенезу при ошибочной репарации. В клетках человека основным источником фотоповреждений является УФ-излучение солнечного спектра. Пигменты кожи, такие как меланин, частично поглощают УФ-энергию, уменьшая частоту димеризации.

Механизмы репарации

Клетки используют несколько путей для исправления фотохимических повреждений:

  • Прямая фоторепарация (фотолиаза) — ферментативное разрушение тиминовых димеров под действием видимого света.
  • Нуклеотидная эксцизионная репарация (NER) — удаление поврежденного сегмента ДНК с последующей синтезой новой цепи.
  • Базовая эксцизионная репарация (BER) — преимущественно при окислительных повреждениях оснований.
  • Гомологичная рекомбинация и неточные репарации — активируются при двуцепочечных разрывах или комплексных аддуктах.

Факторы, влияющие на фоточувствительность

  • Последовательность нуклеотидов — последовательности с соседними тиминами и цитозинами более подвержены димеризации.
  • Структура хроматина — компактность и упаковка ДНК влияют на доступность УФ-излучения.
  • Наличие фотосенсибилизаторов — ксантоны, бензоимидазолы, фторесцентные красители усиливают образование активных фотопродуктов.
  • Клеточные антиоксидантные системы — глутатион, каталаза и супероксиддисмутаза снижают образование активных форм кислорода.

Практическое значение

Фотохимические повреждения ДНК являются фундаментальной проблемой в биологии рака, дерматологии и фотобиологии. Их изучение важно для разработки солнцезащитных средств, фототерапевтических подходов и антиканцерогенных стратегий. В биотехнологии они используются для индуцирования мутаций в микробах и растениях для селекции новых штаммов и сортов.